产品货号:
KFS150
中文名称:
死细胞核染料(PI)
英文名称:
PI
产品规格:
5mg|10mg|20mg
发货周期:
1~3天
产品价格:
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碘化丙啶(PI)与DNA结合,它不具备序列选择性,每4~5个碱基对进行插入。PI也可以与RNA结合,因此在RNA核酸治疗中,需要区别PI是与DNA还是RNA结合,但PI一旦与核酸结合,其荧光增强20~30倍,荧光激发向红色最大光位移大约30~40nm,荧光发射向蓝光最大位移大约15nm。虽然其摩尔吸光系数比较低,但是PI具有一个足够打的斯托克斯位移(stokes shift),可以通过合适的光学滤光器来检测到其标记的核DNA或者标记结合的抗体。PI适用于荧光显微镜、激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞仪以及荧光光度法。
PI不具备膜渗透性,通常用于多色荧光技术中区分死细胞群体。PI的复染操作,可以涉及到多种实验应用,如细胞学标记技术、直接或间接地抗体荧光检测、mRNA表达原位杂交以及特定的细胞结构荧光试剂染色。
组分 | 5mg | 10mg | 20mg |
死细胞核染料(PI) | 5mg | 10mg | 20mg |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃,避光,有效期1年。
- 荧光显微镜贴壁细胞复染
- 样品准备:
根据需要固定样本。PI染色通常与其他染色步骤同时操作。
注意:做复染的样本都必须要做固定与促渗。 - RNA酶处理:
固定于多聚甲醛、甲醛或戊二醛需要进行RNA酶处理,但如果样本用甲醇/乙酸或者丙酮固定,通常可以不必进行RNA酶处理。- 2×SSC溶液(0.3M NaCl,0.03M sodium citrate,pH7.0)简单平衡样本。
- 用含100μg/mL的DNase-Free的RNase的2×SSC溶液中37℃处理20分钟。
- 2×SSC洗涤三次,每次一分钟。
- 2×SSC溶液(0.3M NaCl,0.03M sodium citrate,pH7.0)简单平衡样本。
- 复染操作
- 2×SSC溶液(0.3M NaCl,0.03M sodium citrate,pH7.0)简单平衡样本。
- 制备PI储液:蒸馏水溶解PI固体,浓度为1mg/mL,即1.5mM。
- 制备PI染色液与染色:2×SSC溶液1:3000稀释PI储液为500nM。准备一个反应300μL PI染色液。培养细胞孵育染色时间大约1~5分钟。
- 2×SSC多次洗涤样品,沥干多余缓冲液,抗淬灭剂封片。
- 选择合适的滤光器在荧光显微镜下观察。
- 2×SSC溶液(0.3M NaCl,0.03M sodium citrate,pH7.0)简单平衡样本。
- 样品准备:
- 流式细胞仪悬浮细胞复染
- 样品准备:
根据需要固定样本。PI染色通常与其他染色步骤同时操作。- 收集细胞悬液调整数量至2×105~1×106 cells.
- 离心收集细胞弃上清液。
- 室温加入1mL PBS轻弹管壁,使之重悬。
- 将上述细胞悬液用移液器慢慢加入到4mL的无水乙醇后,最大转速涡旋混匀,将细胞放置于-20℃,5~15分钟。
- 离心收集细胞,去掉乙醇。
- 加入5mL PBS重悬细胞,室温放置15分钟,使得细胞重新吸收水分。
- 收集细胞悬液调整数量至2×105~1×106 cells.
- 复染操作
- 制备PI储液:染色缓冲液(100mM Tris,pH7.4,150mM NaCl,1mM CaCl2,0.5mM MgCl2,0.1% Nonidet P-40)溶解PI固体,浓度为1mg/mL,即1.5mM。每一个染色反应大约需要1mL的PI染色工作液
- 接上A.6.步骤,离心收集细胞,加入1mL PI染色工作液。室温孵育15分钟。直接上机分析。(如需进行荧光显微镜观察,细胞可以离心后去掉上清,以新鲜缓冲液重新悬浮细胞,吸取一滴悬浮液加到载玻片上,加盖玻片后观察。)
- 制备PI储液:染色缓冲液(100mM Tris,pH7.4,150mM NaCl,1mM CaCl2,0.5mM MgCl2,0.1% Nonidet P-40)溶解PI固体,浓度为1mg/mL,即1.5mM。每一个染色反应大约需要1mL的PI染色工作液
- 样品准备:
- 染色质FISH复染
- 样品准备:
根据需要处理样本,蒸馏水简单冲洗,去除缓冲液,最后的冲洗可以有助于减少非特异性背景,再晾干。 - 复染步骤:
- 制备PI储液:蒸馏水溶解PI固体,浓度为1mg/mL,即1.5mM。
- PBS以1:1000稀释DAPI储液。吸取300μL的染色液直接加到样品上,加盖玻片使染色液均匀分布于样本上。如有必要,加入新鲜配制的RNase A至终浓度10μg/mL,并加盖盖玻片使溶液分布均匀。
- 避光室温孵育30分钟(如有RNase A,选择37℃孵育)。
- 小心移去盖玻片,PBS或蒸馏水洗涤样本,去掉多余染料。
- 加盖玻片,用指甲油或中性树脂封片,或根据需要用抗淬灭试剂封片。
- 选取合适的滤光片观察样本。
- 制备PI储液:蒸馏水溶解PI固体,浓度为1mg/mL,即1.5mM。
- 样品准备:
相关搜索:死细胞核染料(PI),碘化丙啶